本文標(biāo)題："芽胞染色使用的菌種需要注意菌齡"
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莢膜染色法
目的
原理
材料與儀器
步驟與方法
實驗注意事項
實驗結(jié)果
目的
內(nèi)孢子為某些革蘭氏陽性菌為適應(yīng)外在惡劣環(huán)境時所產(chǎn)生的一種結(jié)構(gòu)，可在細菌鑑別中當(dāng)作一種分類上的依據(jù)。本實驗旨在教導(dǎo)學(xué)生瞭解內(nèi)孢子染色之原理，
并學(xué)習(xí)其染色法，以區(qū)別細菌內(nèi)孢子與生長細胞有何不同之處。
原理
使用初染劑－孔雀石綠，在加熱條件下進行染色，使染料不僅進入菌體也可進入內(nèi)孢子。接著將進入菌體的染料經(jīng)水洗使其脫色，
而內(nèi)孢子經(jīng)染色后因難以被水洗去，故再用複染劑染色后，內(nèi)孢子仍會保留初染劑的顏色，而菌體則會被染成複染劑的顏色，使內(nèi)孢子和菌體易區(qū)分。
材料與儀器
菌種
染劑
設(shè)備儀器及其他用具材
菌種
培養(yǎng)48小時之Bacillus subtilis
染劑
5%孔雀石綠
0.5%番紅
設(shè)備儀器及其他用具材
酒精燈
接種環(huán)
玻片
濾紙
步驟與方法
此染色方法之操作流程如下：
制備樣本玻片：準(zhǔn)備一乾淨(jìng)之玻片，先滴入1~2滴蒸餾水于戴玻片上，接著使用經(jīng)火滅菌并冷卻之接種環(huán)將培養(yǎng)48小時之Bacillus subtilis菌種液取出，并與其充分混合后，制備成樣本玻片，并短時間在酒精燈上火烤加熱固定。
初染：將樣本玻片滴上孔雀石綠染劑并使其完全覆蓋于玻片標(biāo)本上，接著將玻片以酒精燈火烤方式，再加熱數(shù)分鐘。加熱過程中應(yīng)輕輕搖晃玻片樣本，為避免使孔雀石綠染劑蒸乾，亦可適時補充染劑（圖5-1(A)）。
脫色：將加熱過后之玻片置于室溫中冷卻后，以蒸餾水清洗掉多馀的染劑
複染：滴上番紅染劑進行複染，約30秒
水洗：再以蒸餾水輕輕沖洗掉多馀的染劑
顯微鏡觀察：將玻片風(fēng)乾或以濾紙輕輕擦乾水分后，于顯微鏡觀察細菌中內(nèi)孢子型態(tài)。
實驗注意事項
芽胞染色使用之菌種應(yīng)注意菌齡。
欲制備出好的玻片，在取菌時，應(yīng)用接種環(huán)先充分?jǐn)嚢瑁缓笤偬羧【海駝t菌體沈淀于管底導(dǎo)致涂抹時菌體太少。
染色過程中，可用玻片夾夾住載玻片邊緣，以避免手指被染劑沾染。
實驗結(jié)果
請畫出Bacillus subtilis經(jīng)染色后所呈現(xiàn)之型態(tài)，并描繪內(nèi)孢子于細菌中生長之位置與形狀。
預(yù)期結(jié)果：芽胞應(yīng)呈藍綠色，菌體則為紅色。
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