本文標(biāo)題："植物的粗抽出液制備對于RN酶放感材料有什么方法"

發(fā)布者：YIYI ------ 分類: 站內(nèi)動態(tài) ------ 人瀏覽過 -----時間：2015-6-19 9:44:49

植物的粗抽出液制備對于RN酶放感材料有什么方法
    從感染病毒的植物的粗抽出液制備對于RN酶放感的有毒性材料的方法
    植物組織放在臼中用容至4倍的1:1的水飽和酚和1%焦磷酸四鈉混合液
進(jìn)行勻漿化5分鐘。溶液和玻璃器皿在使用之前經(jīng)過冷卻。整個過程是在5°C
的冷室內(nèi)進(jìn)行。勻漿在6000轉(zhuǎn)/分鐘的速度下離心5分鐘，用吸管吸出含有核
酸的水相并用同的水飽和酚震蕩2次，通過與無過氧化物的醚一起震蕩3次
的方法把酚從水相中除掉。
    后用容量兩倍的冰冷的96%乙醉把核酸沉淀下來，在6500轉(zhuǎn)/分鐘下離
心10分鐘使沉淀物下沉，含有核酸的團(tuán)丸重新浮懸在1%HPO,冷溶液中。
(一)用膨潤土分離TMV-RNA的方法
    膨潤土是一種酸性土，能夠鈍化核糖核酸酶，因而大大增加TMV-RNA的相
對侵染力而不影響完整TMV的侵染力把5毫克膨潤土加到10毫克TMV中，并按上述
的酚—法進(jìn)行。
    膨潤土制備的方法如下:把2克膨潤土浮懸在40毫克水中井在2500轉(zhuǎn)/分鐘的
速度下離心15分鐘。上層液在8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度下離心20分鐘。摒棄第二次的
上層液并使團(tuán)丸重新浮懸起來，在室溫下，在pH 7的0. 1M EDTA中保持2夭。
    然后在8500轉(zhuǎn)/分鐘的速度下再使它沉降。下一次的離心是用pH6的0.01M醋酸
鈉為基物，膨潤土在基物中的濃度按測定的干重2一6%。
    在膨潤土加到TMV之后，水相將是混濁的。大部分的澎潤土在第一次酒精沉淀
(在40,0000/分鐘下〕之前用超速離心的方法除掉，剩下的膨潤土通過后的超速
離心除掉。

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